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elisa試劑盒白介素類酶活性和量能
更新時間:2018-03-19   點(diǎn)擊次數(shù):998次

elisa試劑盒白介素類酶制劑及其底物
凡無毒性又能呈現(xiàn)有色化學(xué)反應(yīng)的酶,原則上均可作為標(biāo)記用。但作為標(biāo)記抗體用的酶應(yīng)滿足下列要求:
(1)來源方便,易于純化;
(2)比活性高,性質(zhì)穩(wěn)定;
(3)酶活性和量能
用簡單方法測定。目前在免疫酶技術(shù)中常用的酶為辣根過氧化物酶(HRP)和鹼性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶,β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。
由于辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)比活性高,穩(wěn)定,分子量小,純酶容易制備,所以zui常用。HRP廣泛分布于植物界,辣根中含量高,它是由無色的酶蛋白和棕色的鐵卟啉結(jié)合而成的糖蛋白,糖含量18%。HRP由多個同功酶組成,分子量為40,000,等電點(diǎn)為PH3~9,酶催化的zui適PH因供氫體不同而稍有差異,但多在PH5左右。酶溶于水和58%以下飽和度硫酸銨溶液。HRP的輔基和酶蛋白zui大吸收光譜分別為403nm和275nm,一般以O(shè)D403nm /OD275nm的比值RZ(德文Reinheit Zahl)表示酶的純度。高純度的酶RZ值應(yīng)在3.0左右(zui高可達(dá)3.4)。RZ值越小,非酶蛋白就越多。值得注意的是,elisa試劑盒白介素類純度并不表示酶活性,如當(dāng)酶變性后,RZ值仍可不變。
HRP的催化反應(yīng)需要底物過氧化氫(H2O2)和供氫體(DH2)。供氫體多為無色的還原型染料,通過反應(yīng)可生成有色的氧化型染料(D)。
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